(一)、ABC法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)

1.切块经二甲苯Ⅰ 4几分钟。

2.组织切片经二甲苯Ⅱ 4分。

3. *Ⅰ 三十秒。

4. *Ⅱ 秒钟。

5. 95%纯酒精Ⅰ 十秒。

6. 95%乙醇Ⅱ 三十秒。

7. 90%香蕉水 十秒。

8.80%双氧水 5秒。

9. 70%酒水 5分钟。

10.饮用水洗。(后期的切块脱蜡至水通常都会1-10)

11.0.3%H2O2甲醇办理组织切片10-207分钟。

12.手洗。

13.抗原修复手机。

14.PBS洗3次，五分钟/次。

15.进入血清孵育20秒钟。

16.摔干血清，放入一抗607分钟。

17.PBS洗3次，230分钟/次。

18.倒入二抗孵育30钟头。

19.PBS洗3次，215分钟/次。

20.参与ABC分手后复合物，孵育30分鐘。

21. PBS洗3次，27分钟/次。

22.DAB-H2O2孵育组织切片5-15分钟的英文。

23.PBS洗，洗水。

24.Harris苏木素染核5-107分钟。

25.用水洗涤，多样性，蓝化，烘干，明亮并封固。

(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)

1.薄片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇处理切开10-20一分钟。

3.沾水。

4.抗原牙齿修复。

5.PBS洗3次，4分钟/次。

6.引入血清孵育10秒钟。

7.摔去血清，成为一抗孵育30-607分钟。

8.PBS洗3次，两遍2小时。加入到二抗，孵育20小时。

9.PBS洗3次，每天2一分钟。

10.加入到SP分手后复合物孵育20-30五分钟。

11.PBS洗3次，很久2多分钟。

12.DAB-H2O2孵育5-二十分钟的英文。

13.PBS洗，水清洗。

14.Harris苏木素染核5-10min。

15.用水洗涤，细胞分化 ，蓝化，脱水过滤，乳白色并封固。

(三)真空负压LSAB法

1.切成片脱蜡至水。

2. 0.3%H2O2甲醇气体压力气体压力整理5min.

3. 清水洗。

4.假设必须，可展开抗原牙齿修复。

5.PBS洗3次，每一次一分钟。

6.引入通常血清负压力负压力治理 5min。

7.摔干血清，加如*免疫抗体，进口真空压差治疗分之五钟。

8. PBS洗3次，每次在2钟头。

9. 放入二抗(即接表面抗原)高压气真空治理 4分钟左右。

10.PBS洗3次，每天21分钟。

11.加盟链卵血清和好物，涡流差压治理 两1分钟。

12.PBS洗3次，每晚2分。

13.DAB-H2O2孵育5-10分鐘。

14.PBS洗，沾水。

15.染核，细胞分化，蓝化，脱水烘干，透明化并封固。

注：高压气空气压力就是把高压气晾干中抽佣高压气。空气压力达66.7KPa(500mmHg)

(四)Envision TM Systems.

1.切块脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇处里切成片107分钟。

3.沾水。

4.抗原修整。

5.PBS洗3次，很久两分钟。

6.引入一免疫抗体孵育30-60分。

7.PBS洗3次，老是2分钟左右。

8.假如加强剂孵育20-30小时。

9.PBS洗3次，每一次2钟头。

10.引入酶标抗兔/鼠，结合物，孵育20-30分种。

11.PBS洗3次，老是2多分钟。

12.DAB-H2O2孵育5-10小时。

13.PBS洗，洗水。

14.Harris苏木素染核5-10分种。

15.洗水，变化，蓝化，甩干，透明色并封固。

(五)免疫组化双染色法。(ⅰ) (Ionmuno-Histochemistry double staimimg method)

1.切块脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇治理切成片101分钟。

3.水清洗。

4.抗原修护。

5.PBS洗3次，两遍两分钟。

6.倒入非免疫性性植物血清，孵育10一分钟。

7.PBS洗3次，只要2min。

8.添加*抗体阳性孵育60秒钟。

9.PBS洗3次，总是 2分种。

10.假如生物学素化的第二步抗体阳性，孵育10分。

11.PBS洗3次，一次230分钟。

12.下载链卵血清素过腐蚀物酶孵育10几分钟。

13.PBS洗3次，只要2多分钟。

14.参与DAB-H2O2孵育5-1020分钟。

15.PBS洗3次，只要一2小时。

16. 填加双染开展液，孵育10秒钟。

17. 假如非抗体性小动物血清孵育10秒钟。

18. PBS洗3次，每一次的2分钟的英文。

19. 建立选则的第2种抗体阳性孵育60多分钟。

20. PBS洗3次，很久2半个小时。

21. 注入海洋生物素标出的其次抵抗能力孵育10几分钟。

22. PBS洗3次，一段时间2 几分钟。

23. 加入到链卵蛋白酶素酸碱性磷酸酶孵育101分钟。

24. PBS洗3次，只要一2秒钟。

25. 注入AEC饱和溶液，孵育5-1015分钟。

26. 干净的自来水洗。

27. 苏木素染核5-10钟头。

28. 水封片。

注：1.*种软型物也可先用链卵淀粉酶素偏碱磷酸酶。

2.第四次显色也能够用BCIP/NBT水溶液，色调为蓝咖啡色，但应与苏木素判别。

(六)、免疫组化的双染色法(ⅱ) (Immuno-histochemistry double staining method)

1.组织切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇外理切成片10多分钟。

3.熨烫。

4.抗原清理。

5.PBS洗3次，每次在一分钟。

6.假如运用的*表面抗原孵育30-60min。

7.PBS洗3次，一次27分钟。

8.参与减弱剂孵育20-307分钟。

9.PBS洗3次，每一次的2几分钟。

10.入驻酶标抗兔/鼠，混合物，孵育

11.PBS洗3次，很久2小时。

12.加盟DAB-H2O2孵育5-10半小时

13.PBS洗3次，一段时间2分钟的英文。

14.下载适用的2种免疫抗体孵育60分钟的时间。

15.PBS洗3次，每天2分钟左右。

16. 注入增加剂孵育20-30半小时。

17. PBS洗3次，每次在220分钟。

18. 加如酶标抗兔/鼠咸性磷酸酶和好物孵育20-30秒钟。

19.PBS洗3次，只要一2秒钟。

20.加盟AEC水溶液孵育5-10小时。

21.日常自来水洗。

22.苏木素染核5-10小时。

23.水性树脂封片。

(七)细胞培养片免疫荧光染色法。

1.将癌细胞于载片或盖玻片的电影用生理变化蒸馏水洗俩次。

2.纯异丙醇调整101分钟。

3.PBS浸洗3次，每天两分钟。

4.加入到建议选用的*抗体阳性孵育120min。

5.PBS洗3次，总是2min。

6.参加荧光抗体阳性孵育60分综上所述。

7.PBS法3次，每次在220分钟。

8.0.1%伊文氏蓝衬染1分钟钟。

9.沾水，萃取沾水。

10. 水溶性胶封片或用储存甘油封片。

(八)真空负压免疫荧光染色法染细胞培养片。

1. 将细胞膜爬于载玻片或盖玻片的X光片用身理氯化钠浸洗多次，*洗去球蛋白液。

2.纯异丙醇统一5-10几分钟。

3.PBS浸洗3次，每每一分钟。

4.引入选取的*表面抗原孵育真空度-压进行处理1五1十分钟。

5.PBS洗3次，每回2分鐘。

6.入驻荧光抗原孵育真空度气体压力处里1两分钟左右。

7.PBS洗3次，一次220分钟。

8.0.1%伊文氏蓝衬染1分钟。

9.机洗，分馏机洗。

10.丙烯酸乳液胶封片或用保护甘油封片。