Calcein-AM是一种种对活人体细胞膜开始荧光标上的人体细胞膜印染实验试剂，发健康荧光（Ex=490nm, Em=515nm）。其有在传统式的Calcein（钙黄绿素）基础框架上接入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，曾加了疏水性树脂，使其要既然穿透力活组织细胞核膜。否则到组织细胞核后，Calcein-AM（原本不发荧光）被体细胞内的酯酶分割确立膜非渗透法性的正负极氧分子Calcein，以此被限制出境在血细胞内潜在出强翠绿色荧光。与某些同种化学制剂（如BCECF-AM和CFDA)比起来，仍然Calcein, AM体癌细胞系致癌性非常低，是比较适合广泛用于活体癌细胞系印染的荧光测试探针，同时还没有压制任何人的体癌细胞系功能性，如繁殖和淋巴腺球的趋化性。

仍然死组织由于缺乏酯酶，Calcein-AM仅使用于对活人体神经元的人体神经元生存游戏下载学习能力各种测试和短期内标识。故而，Calcein-AM往往与死細胞荧光检测器如碘化丙啶（PI）等联动食用，互相开展活細胞和死細胞的荧光相互固色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）可以越过活生殖组织核的生殖组织核膜，仅能越过死生殖组织核膜的混乱区而送达生殖组织核核，并植入生殖组织核的DNA双转鼓可以产生了蓝色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），由此PI仅对死生殖细胞染色法。是由于Calcein和PI-DNA能够被490 nm调动起，从而能用的 荧光显微镜直接留意活人体血细胞和死人体血细胞。而用545 nm激发起，仅大察到死人体细胞。

本化学制剂盒的事业远离就源于Calcein-AM和PI的交叉活性染料，来来活生殖内部和死生殖内部的交叉染料标出，以此来活生殖内部和死生殖内部水平面的进行分析。选择针对调优的科学试验机制，单笔就200µl肿瘤细胞悬液开始上色，各分为能够做500次和1000次监测。

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产品组分

搬家和导出具体方法

在当中A多组分和B多组分需-20℃遮光吹干永久保存，C成分-20℃保留，隔三差五适用可摆到4℃保存文档。一年多可行。

使用方法

1. 工作液的配制

1.1  1×Assay Buffer（不起作用保护液）的标定

从超低温微波炉内拿出10×Assay Buffer，选择日均的使用量灭菌环境拆下掺入，用去阴阳离子水（dH₂O）做10倍扑灭以得见1×Assay Buffer。

1.2  1×染料操作液的配置

1）先将高低温保存图片的Calcein-AM氢氧化钠溶液 (2 mM)和PI液体（1.5 mM）赶回恒温20-30min。

【注意】：次食用可对母液来包装，以以减少频繁冻融多少次。

2）取5µl Calcein-AM液体 (2 mM)和15µl PI水溶液（1.5 mM）加盟5ml 1×Assay Buffer，完全混匀。同时获取Calcein-AM的工作中液酸度为2μM，PI的岗位液质量浓度为4.5μM。可能多种体细胞系的佳刺绣情况多种，头回测试提案做系数测试，以认定 Calcein-AM和PI的适氧化还原电位。均值淘汰的原则英文为实用低的电极氧化还原电位实现好的荧光的结果。

【注意】：由于Calcein-AM的稳定性比较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

2. 染色步骤

2.1 我们对贴壁组织細胞，先用组织細胞刮刀还胰酶-EDTA转化受损细胞膜，后来离心式抽取受损细胞膜（1000 rpm，3min）。

而对于悬停人体细胞，立即离心分离（1000 rpm，3min）回收细胞膜。

2.2 去上清，用1×Assay Buffer足够家电清洗細胞2~3次，以能够充分弄掉杂质的酯酶亲水性。

2.3 用1×Assay Buffer分离纯化細胞悬液，使其溶解度为1×10⁵~1×10⁶肿瘤细胞/ml。

2.4 取100µl固色的工作液入驻200µl组织悬液内，混匀，37℃孵育15min。

【注意】：倘若要有，可延缓孵育时间间隔至30min。

2.5 荧光显微镜下适用490±10 nm激活滤片同样检侧活体神经元（黄环保荧光）包括死体神经元（灰色荧光）。其次，采用545nm的放出滤片仅能检查到死細胞。能够一直在荧光酶标仪下食用适当的滤片参与检查测量。

【注意】：就可以使用的下工艺来改进的两类荧光活性染料的佳作业有机废气浓度。

a) 用0.1%皂素还有0.1-0.5%地gao辛孵育组织10min，可能用70%无水乙醇孵育人体细胞30min，可以光催化原理死受损细胞；

b) 用0.1-10µM的PI溶剂确定死组织神经细胞核着色，以的仅对组织神经细胞核质着色，而不易对组织神经细胞核质着色的佳运转溶度。

c) 用0.1-10µM的Calcein-AM实现死内部着色，以能够 不会轻易对内部质着色的佳运转酸度。第二用此酸度实现活内部着色，去观察植物要不要活内部能被着色。

注意事项

1）伴随Calcein-AM对对环境湿度的相当太敏感，倘若Calcein-AM水溶液两遍取完需使用后，需要轻轻地胶封垫盖子。提醒只能根据累计使用，分开包装胶封垫永久保存。Calcein-AM业务液需求现配所用。

2）碘化丙啶（PI）一 定的导致癌症性，操作使用时一些要要留意防范。若碰到到白色皮肤，要直接用饮用水清理。

3）从而您的安全的和身体健康，请穿实验室服并戴一下性毛织手套实操。

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