实时荧光定量PCR检测服务是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速,高通量,而且高敏感性等特点,该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广泛的应用。

　　实时荧光定量PCR检测服务不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,具有灵敏度高、特异性强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。目前,该技术已广泛应用于分子生物学、医学等学科和基础研究领域,特别是在现代农业转基因作物的定性检测、品系鉴定、转基因成分含量的检测中发挥着重要作用。

　　实时荧光定量PCR检测服务的原理

　　实时荧光定量PCR检测服务是以荧光共振能量转移原理为基础。荧光共振能量转移原理是当一个荧光分子(供体分子)的荧光光谱与另一个荧光分子(受体分子)的激发光谱重叠时,供体荧光分子自身的荧光强度衰减,受体荧光分子的荧光强度增强。Ct值是指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。Ct值是实时荧光PCR中一个很关键的因素,C代表循环(Cycle),t代表阈值(Threshold)。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线。因此,根据荧光探针的发光基团所发出的荧光强度与PCR产物的数量呈对应关系,只要对荧光信号进行“实时”检测并获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。与普通PCR相比,实时荧光定量PCR检测服务可以利用荧光信号实时监测PCR反应过程中每一个循环扩增产物的变化,可以对初始模板量进行定量分析。

　　简单地说,实时荧光定量PCR检测服务的基本原理就是样本核酸扩增呈指数增长,在反应体系和条件*一致的情况下,样本DNA含量与扩增产物的对数成正比,由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物(荧光探针)与扩增产物结合发光,其荧光量与扩增产物量成正比,因此通过荧光量的检测就可以测定样本核酸量。