本试剂盒采用JC-1一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△y）具有极性，JC-1依赖于△y的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。

实操部骤(未经许可对比)：1、 调制JC-1印染操作液：取過量JC-1 Stain (200×)，依据每50μl JC-1 Stain (200×)下载8ml ddH2O的百分比做好稀释工作中的的JC-1，胸骨后疼痛Vortex积极主动融解并混匀JC-1。以后再下载2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后成为JC-1脱色工作中的的液。6孔板每孔需要的JC-1脱色工作中的的液的量为1ml，其余的培养餐具的JC-1脱色工作中的的液的水量由此类推。2、 設置阳性反应相较比较：引荐CCCP(10mM)申请加入到组织内部核塑造培养液中整理组织内部核。己经遵循下述最简单的方法存放JC-1，去线粒体膜电势的检查测量。而对于某一的组织内部核，CCCP的角色质量浓度和角色时长将会有一定的差异，需自己符合关联论文知料知料确认。3、而对于浮动体细胞：a. 取1～6×105内部，重悬于0.5ml内部培植液中，内部培植液中不错含血清和酚红。b. 注入0.5ml JC-1染料事情液，倒置无数次混匀。细胞系培养教育箱中37℃孵育。c. 在孵育哺乳期间，都按照每1ml JC-1 Buffer(5×)申请加入4ml减压去离子水的此例，配成适量的的JC-1 Buffer(1×)，并保存于冰浴。d. 37℃孵育截止后， 4℃ 600g离心法3～4min，沉垫内部系。弃上清，考虑要不可吸除内部系。f. 就用JC-1 Buffer(1×)重悬后，用荧光高倍显微镜或机光共凝聚高倍显微镜通过观察，也能够用荧光分光光度计检则或流式肿瘤细胞术肿瘤细胞仪浅析。4、相对 贴壁细胞膜：关注：相对贴壁血组织内部，若是 想应用荧光分光光度计或流式组织内部血组织内部仪探测，时先抽取血组织内部，重悬后参考价值浮悬血组织内部的探测技巧。a.吸除6孔板锻炼液，表明具有试验若有相应不错用PBS或其它的适量盐溶液洗衣机清洗上皮人体癌细胞一场，申请加入1ml上皮人体癌细胞锻炼液。上皮人体癌细胞锻炼液中不错含流血清和酚红。b. 加入到1ml JC-1印染作业液，做好混匀。癌细胞提升箱中37℃孵育。c. 在孵育前三天，遵循每1ml JC-1 Buffer(5×)入驻减压生理盐水的比例怎么算，标定适度的JC-1 Buffer(1×)，并平放于冰浴。d. 37℃孵育尾声后， 吸除上清，用JC-1 Buffer(1×)洗衣2次。e. 融入2ml血细胞致力于液，致力于液中能够含带血清和酚红。f. 荧光高倍显微镜或脉冲光共整合高倍显微镜下观查。5、关于纯化的线粒体：a. 把自制好的JC-1印染工做液再换JC-1 Buffer(1×)配制5倍。b. 0.9ml 5倍直接稀释就可以的JC-1染料操作液添加入0.1ml总蛋白酶量为10～100μg纯化的线粒体。c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪验测：混匀后单独用荧光分光光度计做日子扫一扫，激励光光光激发光谱为485nm，火箭发射光光光激发光谱为590nm。若是运行荧光酶标仪，激励光光光激发光谱不能够设备为485nm时，需要在475～520nm标准内设备激励光光光激发光谱。单独，也需要规范下部骤6中的光光光激发光谱设备做荧光验测。d. 用荧光体视显微镜或脉冲激光共整合体视显微镜检查：形式同上面的步6。6、荧光探测和最终解析：检侧JC-1缩聚反应时都需要把提升光设有为490nm，导弹光设有为530nm；检侧JC-1聚合反应物时，都需要把提升光设有为525nm，导弹光设有为590nm。冒出粉红色荧光说明书怎么写线粒体膜电位差较好通常，血细胞的情况也较好通常。 

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)注意事项
1，JC-1（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

2，禁止把JC-1固色剂的减慢液（5×）都配置成JC-1固色剂的减慢液（1×），本化学药品盒选用整个过程中需马上选用JC-1固色剂的减慢液（5×）。3，如JC-1 Buffer(5×)中含沉淀物，应该全部消融后就需要利用，为加速消融需要在37℃微波加热。 JC-1电极承载完并洗涤剂后尽量用一些在半小时的英文内达成之后的判断。在判断前需冰浴手机截图。4，应防止致使反复冻融。难以先配好的凉茶JC-1 Buffer(1×)后加入JC-1 Stain(200×)，不能出现JC-1很容易有效充分的充分均匀溶解，较为严重的应响以后的论文检测。还可以20～25℃水浴温育稍作至整体溶化后施用.5，垃圾装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤剂剂时，尽可能的使JC-1 Buffer(1×)控制4℃左古，这段时间的洗涤剂剂疗效好点。6，CCCP为线粒体電子传输链调控剂，毒害，请特别注意谨慎防护衣。 7，要您的绿色安全和绿色，请穿进行实验服并戴单次性手淘实操。