
技术文章/ Technical Articles
更新时间:2020-10-31
浏览次数:1564测定意义:
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
测定原理:
在酸性环境中,ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与4-氨基安替和铁反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。
自备仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1酶标板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。
标准品:液体×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。
粗酶液提取:
称取约0.1g组织,加试剂一1mL充分研磨,4oC、10000rpm离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用试剂一稀释。
测定:
1.酶标仪预热30 min以上,调节波长到510 nm。
2. 试剂二置于37 oC水浴中预热30 min以上。
3. 空白管:在酶标板中加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后37℃保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:在酶标板中加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后37℃保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A标准管。
5.对照管:在酶标板中加入40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后37℃保温15min;加入试剂四120μL,混匀;后加入4μL上清液,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A对照管。
6. 测定管:在酶标板中加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后37℃保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A测定管。
其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。