上海信帆为您甄选：western blot检测中异常实验结果分析！

更新时间：2021-06-18

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上海信帆为您甄选：western blot检测中异常实验结果分析！

上海信帆生物提供western blot检测服务，很多老师自己做实验的时候会出现各种异常情况，本公司把可能导致的原因做了一个整理汇总，希望对广大刚入门的用户有所帮助，下面就让我们一起来看看吧！

关与Western blot实验操作不正确分析一下

『无信号』

原因	建议
一抗与二抗不匹配	选择针对一抗来源种属制备的二抗；
一抗不识别目的的种属的蛋白	1)检查抗体的说明书，适用范围内是否包含目的种属 2)使用阳性对照来检查抗体质量
一抗或二抗不足，没有足够的抗体结合到目的蛋白	1)降低抗体稀释倍数，增加抗体浓度 2)延长孵育时间
封闭剂与一抗有交叉反应	改变封闭剂
抗原不足	1)每个泳道加入20-30ug总蛋白 2)制备样品要使用蛋白酶抑制物及使用阳性对照
在检测的组织内目的蛋白表达水平低	检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，也可更换细胞系
蛋白转膜效率低	1)利用丽春红检测转膜效率;检查转移装置是否电极弄反 2)转移前膜是否用甲醇侵泡过
膜过渡洗涤	减少洗涤时间和强度
叠氮钠抑制二抗活性	二抗稀释液内不用叠氮钠

『没了特异条带』

原因	建议
细胞系传代过多后蛋白表达谱发送变化	1)使用未传代或传代次数较少的细胞系进行样品制备
蛋白本身有很多修饰	1)查阅文献，确定目的蛋白是否存在多种修饰
蛋白被消化或者降解	1)蛋白样品确保未被污染，确保含有蛋白酶抑制剂
所检测蛋白存在多种剪接体，导致分子量大小不同	1)查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA
一抗或二抗浓度高	1)减低抗体浓度
洗涤不够	1)充分洗涤

『条给大家探讨认识一下PCB高频电路板。小歪斜确』

主要原因	推荐
原因淀粉酶被吸附	抓实蛋清质产品的样品未被污染源，抓实包含有蛋清质酶减缓剂
有其他的剪接体	查取学术论文或凭借搜数据报告库来知道该蛋白酶是不是也具备很多总长度各不相同的识别码mRNA
重新组合球蛋白	在线检测是否是存在的特别放入的血清
特有蛋白酶如MDM2等	认真仔细仔细阅读抗体阳性反映书

上海信帆为您甄选：western blot检测中异常实验结果分析！

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