人转化生长因子β1（TGF-β1）检测试剂盒(ELISA方法) 的正确使用方法

查重操作过程

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人转化生长因子β1（TGF-β1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人转化生长因子β1（TGF-β1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

原材料回收、净化处理及保存文档技巧

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自购危险物品

1.     酶标仪（450nm）

2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒温恒湿箱

方法特别注意问题

1.  试剂盒保存在2-8℃，安全使用前高温和平60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶全溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。

2.  进行实验中只用的板条应会放回自封袋中，封严（高湿非常干燥）留存。

3.  预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

4.  要严格遵循情况说明书上标上的周期、加液量及步骤完成温育操作的。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

制剂盒组建

注：准则品渗透压先后为：24、12、6、3、1.5、0 ng/mL.

微生物培养基的做好准备

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板具体方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

控制步驟

1.  从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结局分辨

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免疫试剂盒的性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：低检测浓度小于0.1 ng/mL。

3.  特男人：不与其他一些可可溶型式相仿物相互发应。

4.  重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，遮光隔潮存为。

6.  有效期：6个月

免责证明

1.   微生物培养基盒全部研究方案便用，不允许用在临床治疗进行工作或人体进行工作，一旦生产生的所有的结局，由进行工作者承担起，本总部概不承接承接。

2.   要严格，并按照原因分析书工作，检测报告者违范原因分析书工作，影响由检测报告者分担。

人转化生长因子β1（TGF-β1）检测试剂盒(ELISA方法)