原位杂交的实验送样标准

信帆生态学展示 原位改良品种判断判断服务项目。方法部骤如下所述：

1.聚集稳定：聚集抽出PBS浸洗后之后放进原位杂交种稳定液（動物）中稳定12h超过，4°存放车辆运输。

2.脱水现象：进行固定后在进风橱内切取最终目的空间区域集体块约3mm厚，放上15%乳糖液体中8h，后换30%乳糖液体中過夜。

3.冷冻薄片调整：冷冻薄片环境温度阴干，置放原位改良品种调整液（動物）调整10min，于PBS（PH7.4）中在脱色摇床周边抖动洗條3次，每一次的5min。

4.处理及肠蠕动：跟据聚集类，固定不动時间的长短及目标的地位，挑选多种的处理液开展处理，具体化处理必备条件见上表。自然生态水冷却后组化笔划圈，跟据多种聚集多种目标性能，中滴加球蛋白酶K(20ug/ml) 37°肠蠕动，肠蠕动時间见上表。注射用水冲干净后PBS洗3次，每一次5min。

5.阻绝内源性过脱色物酶：滴入3%甲醇-H2O2，室内温度阴凉孵育15min，将玻片放置PBS（PH7.4）中在脱色摇床周边颤动洗衣3次，没次5min。

6.预交配：加入适量预交配液，37°C孵育1h。

7.交配：倾去预交配液，滴入含探头交配液, 衡温箱交配留宿。交配经济条件见上表。

8.交配后洗衣：洗去交配液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC空调温度洗10min。只恨特异交配体较多，也可以曾加甲酰胺洗衣。

9. 滴入相对应的构成电极混种杂交育种育种：轻柔地脱水切开，滴入已提前预热的一定的构成电极混种杂交育种育种液(见上表及表格)（60 μL），的水平放置到湿盒内40℃混种杂交育种育种45 min。此期间中在湿盒底层融入50ml 2× SSC，防范干片。

10.改良品种后洗條：倾去改良品种液，将切成片逐个用40°C暖机的2× SSC、1× SSC、0.5× SSC、0.1× SSC于40°C浸洗5 min。注：只恨特喜欢的人改良品种体较多，也可以此时步提高洗條时间段、多次及调控改良品种液中甲酰胺浓硫酸浓度。

11. 加入适量相对应的卫星数据探头：加入适量含卫星数据探头（见上表及表格）杂交育种液，溶解比1：400.42°孵育3h。后从左到右根据以内SSC洗滌：2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。

12.血清外移：加入适量外移血清通常兔血清 在常温孵育30min。

13. 孵育HRP标记符号鼠抗-地-高-辛抗原（HRP-anti-DIG ）：倾去血清闭合液，滴入HRP- anti-DIG。37°孵育50min，后PBS洗5min  4次。

14.DAB显色：薄片稍漂洗后，在圈里滴入生鲜调制的DAB显色液，体视显微镜下操作显色时，弱阳为棕金色，注射用水擦洗薄片中止显色。

15.复染细胞结构核：苏木素染液复染3min的样子，杭州饮水洗，苏木素差异性液差异性数秒，杭州饮水洗，苏木素返蓝液返蓝1min，流水账单冲干净。

16.脱水器封片：将切块由小到大加入75%酒水6min-85%酒水6min—100%酒水I 6min—100%酒水II 6min-正丁醇6min—二甲苯合理，将切块从二甲苯中丢掉稍干透后，封片状封片。

效果判读：呈阳性为棕浅黄色，神经细胞为黑色。

送样规定：

1、切块前操作规范：鲜美策划 干冰公路运输业后做急冻切块；或取2mm以上板厚为的鲜美策划 ，5min内付出原位混种杂交种加固液内加固，4℃地温同步保存公路运输业，以免冰冻结霜，迅速包埋切块后进行原位混种杂交种实验设计，加固准确时间较长的影响核酸排除率；

2、冷冻薄片：冷冻薄片-20℃搬家；

3、石蜡切成片：石蜡切成片恒温的物流运输；

4、神经元核爬片：神经元核爬片加原位有性杂交紧固液紧固15min后，换无酶PBS，隔绝，4℃车辆运输。

原位杂交育种的實驗送样需求