上海信帆生物教你正确使用明胶酶谱试剂盒

基质金属蛋白酶(mmp2/9)试剂盒陈述：产品合金材料蛋白质酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性酶的酶原结构类型分沁，碱化后可能分解 组织内部外栽培机质的胶原淀粉酶，是指胶原酶。经过不良影响组织内部外栽培机质，胶原酶参与的胚胎健康成长、价值形式进行、组 织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的 MMP-2、MMP-9 参入各项身体与病理学期间，其在研究探讨原因和治愈中的意义所在愈发面临注重。

本化学制剂盒用到酶谱法(zymography)检查 MMP-2、MMP-9  亲水性。Zymography  都是种得众施用的、基 于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的血清酶检测方法，其准确度度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和步骤是：备制加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 疑胶，含淀粉酶酶的试样再此疑胶中参与电 泳， 电泳结速后导出来凝露与酶影响 Buffer 孵育，凝露印染与脱色。凝露中考虑到含底物淀粉酶而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮区域，从而能同时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异核蛋白底物及酶学反应缓存液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及吸附性，检 测敏锐度~1 nM。化学药品盒可做好 50 次规定小胶的检测，假如小胶加样孔为 10~15个，则合计可的检测 500~750 个样板。

 基质金属蛋白酶(mmp2/9)试剂盒适用: 检查 MMP-2、MMP-9 酶谱及渗透性（Detect MMP2 and MMP9 as low as 1 nM）。

 組成与贮存 (50 assays)：

1.2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml µl, 20 ºC；
2.10 × Substrate G, 50 ml, 20 ºC；
3. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用时用蒸馏水稀释；

4. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 安全使用时用分馏水就稀释；

5. SDS-PAGE 抑菌凝胶淀粉酶质考马斯亮蓝复染液, 4 ºC。

检查测量进行：

1. 化学合成含 MMP 底物核蛋白的 SDS-PAGE 妇科疑胶的作用：推建剥离 胶溶度为 8%。假设按照标准单位编译程序化学合成 SDS- PAGE 妇科疑胶的作用。将 10 × substrate G 溶解，并 90 ºC 进行加热 5 小时。各在浸提胶和剥离 胶中更多加 入 10 × substrate G 并使之掺水 10 倍，混匀后参加过盐酸铵和 TEMED，等等妇科疑胶的作用配位聚合。

2. 待测试品 1:1 扑灭于 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可擅自配好的凉茶：4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，融合后随便上样。切记不要加温转化，并仅 用到要加重现剂的上样抗震液。可经过预做实验的时候认定加样量，用到常见的球蛋白预染  Marker 就可以了。阳 性对比(可供选择方法流程)：可行人、小鼠、大鼠或兔 100µl 全血与 100µl 2 × SDS-PAGE non-

reducing buffer 等大小融合，取 5-15µl 上样。

3. 低工作电流量恒流电泳，每一项块小胶工作电流量为 20mA/gel。溴酚蓝跑出妇科凝胶前沿性时完电泳。

4. 洗衣凝露的作用的作用：取掉凝露的作用的作用，祛除萃取胶，引入贮罐内.可先用只要不过量蒸溜水清洗凝露的作用的作用，其次引入10ml

1× Buffer A(用水蒸气纯水配制)，高温浸洗抑菌凝胶 2 × 30 7分钟。后面换液。

5.  孵育：放干 Buffer A。加如 10 ml 1× Buffer B(萃取水稀释溶解)，常温或 37ºC 孵育 1~5 1天。弱阳 对 照可能血中的 MMP 通畅 37ºC 孵育 1 1天只能表示。如 MMP 活力性低，应不断增加孵育时期为 10 1天或 过一整夜。

6.  显色：扔掉 Buffer B，加盟 SDS-PAGE 凝露核蛋白酶质考马斯亮蓝刺绣液（方法步见 SDS-PAGE 凝 胶核蛋白酶质考马斯亮蓝刺绣液阐述书）。凝露的大部件板块中被深染，在有 MMP 条带的选址 不被染 色而形成了晶莹板块中。合理体板块中的选址和标准标识 MMP-2、MMP-9 的的大小选址(酶谱)及 抗逆性。阳 性對照将在 66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa 选址会出现合理体条带。

7. 条带打印机打印拍照机：将抑菌凝露加在打印机打印拍照机仪上打印机打印拍照机。虽 MMP 条带透明化，但抑菌凝露题材图片因此切实黑灰色。很好解决 小妙招：也可以非电子散射光打印机打印拍照机，或用图片软件图像文件外理程序流程进行调节题材图片提示为灰度提示，并不应设备为黑灰色.MMP条带则为黑色，种题材图片黑条带白的模式是日文职称论文中zui常用的模式。

上海信帆生物教你正确使用明胶酶谱试剂盒