信帆生物：引物合成文献上线

《 LncRNA PSMA3-AS1调理miR-186-5p/SOX4轴对运动神经母组织瘤组织繁殖、挪动和肉瘤样癌的导致》

提要： 意图 探索长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1（long non⁃coding RNA PSMA3⁃AS1，lncRNA PSMA3⁃AS1）对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对微小RNA⁃186⁃5p（microRNA⁃186⁃5p，miR⁃186⁃5p）/性别决定区Y框蛋白4（sex determining region Y box protein 4，SOX4）轴的调控机制。方法 利用LipofectamineTM 3000试剂将si⁃PSMA3⁃AS1及其阴性对照、miR⁃186⁃5p inhibitor及其阴性对照分别转染至人神经母细胞瘤细胞SH⁃SY5Y中，随机分为Control组（未转染质粒）、si⁃NC组（转染si⁃PSMA3⁃AS1阴性对照）、si⁃PSMA3⁃AS1组（转染si⁃PSMA3⁃AS1）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC组（共转染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor阴性对照）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor组（共转染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor）。采用qRT⁃PCR法检测各组细胞中PSMA3⁃AS1、miR⁃186⁃5p和SOX4 mRNA的表达水平；Western blot检测各组转染细胞中SOX4蛋白的表达水平。采用CCK⁃8法、Transwell实验检测各组转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃186⁃5p与PSMA3⁃AS1和SOX4之间的靶向关系。结果 相较于Control组和si⁃NC组，si⁃PSMA3⁃AS1组细胞中的PSMA3⁃AS1表达水平、细胞存活率、迁移及侵袭细胞数均降低（均P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，PSMA3⁃AS1能靶向负调控miR⁃186⁃5p，而miR⁃186⁃5p能靶向负调控SOX4。敲低PSMA3⁃AS1后细胞的miR⁃186⁃5p表达水平升高，而SOX4 mRNA和蛋白表达水平均降低（均P<0.001）。回补实验发现，相较于si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC组，si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor组SOX4 mRNA及蛋白表达水平、细胞存活率、迁移及侵袭细胞数均升高（均P<0.001），而miR⁃186⁃5p表达水平降低（P<0.001）。结论 敲低PSMA3⁃AS1可能通过调节miR⁃186⁃5p/SOX4轴抑制神经母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

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