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基质金属蛋白酶(mmp2/9)试剂盒描述英文：基本材料塑料球蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无生物的酶原的形式代谢，纯化后就能够降解塑料 神经元外机质的肌肤胶原组织酶，又被称为胶原酶。凭借干扰神经元外机质，胶原酶参与活动胚胎健康发育、行态进行、组 织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的 MMP-2、MMP-9 参与性繁多生理变化与病理报告流程，其在研发鉴别诊断和进行治疗中的有何意义亟须获得要重视。

本免疫试剂盒采用了酶谱法(zymography)查重 MMP-2、MMP-9  活性酶。Zymography  是一个种被适用的、基 于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋清酶检测方法，其灵敏度度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和过程是：配制加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 疑胶，含血清酶的印刷品于此疑胶中开展电 泳， 电泳终止后拿掉疑胶与酶作用 Buffer 孵育，妇科凝胶的作用上色与脱色。妇科凝胶的作用中根据含底物血清而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮区域，从而能时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异血清底物及酶学反应降低液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及亲水性，检 测快速度~1 nM。化学试剂盒可做 50 次基准小胶检则，只要小胶加样孔为 10~15个，则共计可检测工具 500~750 个供试品。

基质金属蛋白酶(mmp2/9)试剂盒适用: 探测 MMP-2、MMP-9 酶谱及催化活性（Detect MMP2 and MMP9 as low as 1 nM）。

形成与店铺 (50 assays)：

1.2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml µl, 20 ºC；
2.10 × Substrate G, 50 ml, 20 ºC；
3. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用时用蒸馏水稀释；

4. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 操作时用分馏水就稀释；

5. SDS-PAGE 疑胶核高蛋白考马斯亮蓝固色液, 4 ºC。

测试操作步骤：

1. 隔离出来纯化含 MMP 底物蛋白质的 SDS-PAGE 疑胶：选择隔离出来胶氧浓度为 8%。是以规范系统软件隔离出来纯化 SDS- PAGE 疑胶。将 10 × substrate G 冰化，并 90 ºC 采暖器 5 分种。分开在浓缩提炼胶和隔离出来胶中上限加 入 10 × substrate G 并使之溶解稀释 10 倍，混匀后参与过磷酸铵和 TEMED，停留疑胶聚合物。

2. 待测供试品 1:1 兑水于 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可随意制备：4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，分层后会上样。勿烧水变形，但会仅 适用不用修复剂的上样减慢液。可可以通过预测试认定加样量，适用普普通通球蛋白预染  Marker 既能。阳 性相较比较(自选流程)：可行人、小鼠、大鼠或兔 100µl 全血与 100µl 2 × SDS-PAGE non-

reducing buffer 等比热容混，取 5-15µl 上样。

3. 低直流电恒流电泳，任一块小胶直流电为 20mA/gel。溴酚蓝跑出凝胶的作用领先时开始和结束电泳。

4. 洗衣抑菌凝露：去掉抑菌凝露，去掉沉淀胶，放上玻璃容器内.可先用适当的蒸溜水清扫冲洗抑菌凝露，第二步放入10ml

1× Buffer A(用萃取水就稀释)，环境温度浸洗妇科凝胶 2 × 30 分钟的时间。正中间换液。

5.  孵育：垮掉 Buffer A。参与 10 ml 1× Buffer B(水蒸气纯净水溶解)，环境温度或 37ºC 孵育 1~5 时段候。弱阳 对 照亦或血中的 MMP 常常 37ºC 孵育 1 时段候时需提示 。如 MMP 活性酶低，应延时孵育时段为 10 时段候或 过一晚。

6.  显色：放干 Buffer B，参加 SDS-PAGE 抑菌凝露蛋清质考马斯亮蓝着色的液（工作工作步骤见 SDS-PAGE 凝 胶蛋清质考马斯亮蓝着色的液阐明书）。抑菌凝露的大的部分城市被深染，在有 MMP 条带的地址 不被染 色而成型晶莹城市。乳白色城市的地址和区域技巧 MMP-2、MMP-9 的长宽比地址(酶谱)及 活力。阳 性相较比较将在 66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa 地址发生乳白色条带。

7. 条带扫一扫拍照：将凝露放至扫一扫拍照仪上扫一扫拍照。而是 MMP 条带无色，但凝露游戏时代时代背景未必真正意义黑灰色。防止 心思：该用非散发出光扫一扫拍照，或用游戏影像治理系统程序优化游戏时代时代背景呈现为灰度呈现，并要尽可能的设有为棕色.MMP条带则为白，本身游戏时代时代背景黑条带白的小论文各式是用英语小论文中zui普遍的小论文各式。

说明

1. 10 mM 才能 EDTA *缓和 MMP 活性氧。

2. 疑胶常温、干燥：利于用聚丙稀酰胺疑胶干胶控制系统室内温度飞速晾干抑菌凝胶，为*统计删去。

基准文献：

1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494

2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980, 102, 196–202

SDS-PAGE 妇科凝胶血清质考马斯亮蓝染色剂液代表书（实验试剂盒内置）

基本考马斯亮蓝 SDS-PAGE 凝露的作用血清质染料法是调查室可用的凝露的作用染料法方式 。银染方式 或许灵巧度 高，但所要采血管复杂化而且有毒的不利，进行环节冗杂，易于抑制得到好的刺绣功效。

印染方法流程：

1. 此脱色剂液仅以运作液，施用时可以直接将聚丙稀酰胺凝胶的作用投入锻炼皿中以考马斯亮蓝脱色剂液覆盖率凝 胶，并很快摇晃 2h；

2. 倾去固色液，用脱色液清洗妇科凝胶；

3. 以脱色液包含妇科凝胶，速度慢摇晃 2h，倾去脱色液，加上入新脱色液开始脱色，直赚取明晰的 海蓝的条带和纯洁整洁的视频背静（大多数此阶段可以 2～4h，也可脱色过一晚至明晰的海蓝的条带和纯洁整洁 的视频背静）；

4. 对抑菌凝露的作用做出具体分析和照相机，抑菌凝露的作用可放入在    7％的醋酸钠中储存。也需用抑菌凝露的作用干胶系统对 抑菌凝露的作用做出工作后储存。

安全性：含有甲醇，无特殊毒性，按一般化学品操作规程处理。

说明：

1. 上色液成分：0.25g 考马斯亮蓝 R250 420ml 甲醇 100ml 冰醋酸钠，定容至 1000ml，混合型喂养 1h 后用 Whatman 1 号滤膜过滤器，于常温可无限大期另存；

2. 脱色液香料配方：冰醋酸钠:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保持液：7％冰冰醋酸；

4. 抑菌凝胶染色法剂在这之后，染色法剂液能否的回收应用应用，置入新储槽内，在常温或 4 ºC 保护，可间断性实用 2-4 次。