ALP碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）

服务培训简绍：

碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同工酶。已发现有 ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5与 ALP6六种同工酶。其中第1、 2、6 种均来自肝脏，第3种来自骨细胞，第4种产生于胎盘及癌细胞，而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。正常的骨代谢是通过成骨细胞生长与破骨细胞建立骨吸收而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（ALP），酶活性的变化是成骨细胞生理现象的重要标志。在骨代谢研究领域被用作骨形成重要指标之一。

本实验采用偶氮偶联法来显示碱性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色（蓝色）产物，以此证明酶的定位。

实验操作大概具体流程：

骨组织PFA4℃固定保存一周内（24h-48h最佳）——骨组织用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙——脱水浸蜡包埋石蜡切片——石蜡切片脱蜡至水——提前配制过滤的ALP染色液染色——烘箱烤片——中性树胶封片。

可是判读：

骨机构沿骨膜内杂乱无章分布的矮柱型成骨体体细胞呈橙色，软骨处呈橙色，骨小梁表面呈橙色，体体细胞质呈红色的。

其他的骨质机构含酸碱度磷酸酶的组织呈天蓝色，组织核呈红颜色。

送样运输配送规定：

1、做ALP染色的组织需要用PFA 4℃放置储存运输业，放置7天时间内出现脱水包埋切成片染料。在常温放置数分钟才会引响到酶活，4℃放置已超7天时间也会引响到酶活，形成抗体阳性衰弱竟然丢了。

2、染ALP的骨组织需要使用我司EDTA脱钙液4℃低温脱钙。其他脱钙液脱钙的组织，不保证染色结果。用酸性脱钙液脱钙的骨组织，酶失活阳性丢失。建议在我司进行骨组织的全套脱钙制片和染色。

3、不脱钙骨进行化下一步范例出品人加工处理形式对ALP酶活反应很大，不脱钙骨进行化组织切片和切磨片近年不觉得做此复染。

ALP碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）